基于核酸外切酶酶切反应的纳米金比色法检测T4多聚核苷酸激酶活性

欧丽娟^1,2，刘宏伟¹

1. 湖南工学院材料与化学工程学院2. 湖南大学化学化工学院,化学生物传感与计量学国家重点实验室

摘 要：建立了基于纳米金凝聚变色效应的检测T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)活性的方法。鉴于寡核苷酸链标记的纳米金能够稳定存在于一定浓度的盐离子缓冲溶液中,利用5’羟基修饰的发夹型探针作为金标探针,有T4 PNK存在时,金标探针5’羟基磷酸化,λ核酸外切酶被激活,酶切发夹型探针茎部双链DNA片段,接着在RecJf核酸外切酶作用下降解纳米金上修饰的残余的单链DNA,使得纳米金在一定盐离子浓度下团聚,溶液变成蓝紫色。结果表明,T4 PNK激酶检测的线性响应范围为0.5~4.0 U/mL,检测下限为0.24 U/mL。

关键词：生物传感器;核酸外切酶酶切反应;纳米金;比色法;T4多聚核苷酸激酶;